NRPB11L NHS-瓊脂糖凝膠FF

相關介紹：

NHS-瓊脂糖凝膠FF是一種將瓊脂糖凝膠微球用NHS活化形成的生物親和層析分離介質。該產品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網架結構，與生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高，非特異性吸附少，流速快等特點。本活化的瓊脂糖凝膠能溫和的與氨基基團反應，特別適合偶聯抗體、鏈霉親和素、酶、核酸等功能性生物大分子。

技術指標：

應用實例：

實驗名稱：NHS-瓊脂糖凝膠FF偶聯抗體。

實驗步驟：

1. 配制抗體：取100 mg IgG加10 ml 偶聯緩沖液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, pH 8.3)溶解，留0.1 ml以便測定偶聯效率。

2. 偶聯反應：取10 ml NHS-瓊脂糖凝膠FF，用50 ml 1 mM HCl分三次清洗去除保存液，清洗后立即加入抗體偶聯溶液中，4℃，震蕩反應6 小時或者過夜，進行偶聯反應。

3. 封閉：濾出反應液，用50 ml偶聯緩沖液清洗偶聯后的凝膠，然后用10 ml封閉緩沖液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, 0.5 M 乙醇胺, pH 8.3)，室溫震蕩4 小時（或者過夜）封閉未偶聯的基團，封閉后用20 ml蒸餾水洗干凈即可。

4. 檢測：偶聯前后的反應液用SDS-PAGE檢測對比偶聯效率，偶聯好的填料根據配基特性測定功能和載量。

注意事項：

1. 如果配基的穩定性不了解，可以選擇不同pH的緩沖液和溫度，用配基相應濃度的溶液0.5 ~ 1 ml，不加填料模擬偶聯條件，觀察溶液是否會產生沉淀。有沉淀產生對應的偶聯效果就不好，可以稍微降低pH或溫度，同時可以加5%左右的甘油或PEG保護蛋白，避免產生沉淀，總之對于任何配基最好能了解其溶解性及穩定性，避免實驗失敗導致損失。

2. 如果偶聯的配基不穩定，可在搖床上4℃振搖偶聯1 ~ 12小時，以維持配基的活性。偶聯配基后盡快清洗填料，避免在高pH 條件中，配基失活。

3. 更穩定的配基可以直接溶解于0.2 M碳酸氫鈉，可適當提高溫度，如室溫，偶聯時間則相應可縮短至1 ~ 2 小時。

4. 偶聯蛋白的較適pH為7.5 ~ 9.0，在室溫或4℃均可，提高溫度能增加配基的偶聯效率，根據蛋白的穩定性選擇合適的pH 和溫度。偶聯蛋白溶液的濃度以5 ~ 15 mg/ml較佳。凝膠體積和配基溶液的體積比以1:0.5 ~ 1:2.0較佳。

5. 偶聯的緩沖液可以是碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液，但絕對不能使用氨基的緩沖體系，如Tris-HCl緩沖液。

6. 封閉的緩沖液一般使用帶氨基的小分子試劑，如乙醇胺、Tris等，pH在8 ~ 9室溫封閉數小時可完全封閉。推薦的封閉緩沖液為0.5 M 乙醇胺，0.5 M NaCl，pH 8.3或0.1 M Tris-HCl，pH 8.5。

7. 在偶聯中盡量使用溫和的混勻方式，如震蕩、翻轉、旋轉等。如使用磁力攪拌器或者機械攪拌，需要降低攪拌的速度，只要把填料能混勻完全懸浮起來即可，避免劇烈攪拌使凝膠微球破碎。

8. NHS-瓊脂糖凝膠FF需現取現用，避免時間過長造成活性降低。

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