NRPB01L 重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF

相關介紹： 

蛋白A是一種金黃色葡萄球菌細胞壁蛋白質，包含有5個區域，可以同IgG的Fc片段結合。作為一個親和配基，蛋白A能夠比較緊密地偶聯到NUPharose上，使得這些區域可以同游離的IgG自由結合。一分子的蛋白A可以結合兩分子的IgG。

技術指標：

抗體與蛋白A、蛋白G的結合力：

注：-表示不結合；+表示微弱結合；++表示中等結合；+++表示很強結合。

應用舉例：

結合緩沖液：20 mM磷酸緩沖液，150 mM NaCl，pH 7.4

洗脫緩沖液：0.1 M檸檬酸緩沖液，pH 4.0

中和緩沖液：1 M Tris ~ HCl，pH 9.0

1)1 ml重組蛋白A瓊脂糖凝膠預填柱用5 ~ 10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液；

2)用結合緩沖液結合緩沖液平衡 5 ~ 10個柱床體積；

3)將5 ml兔多抗血清用結合緩沖液稀釋到50 ml，0.45 μm濾膜過濾上樣；

4)用結合緩沖液再洗 5 ~ 10個柱床體積；

5)用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調節其pH至中性；

6)每次使用后用3 ~ 5個柱床體積的0.1 M 檸檬酸緩沖液（pH 3.0）再生清洗；

7)SDS-PAGE（圖1）電泳分析洗脫下來的兔多抗純度在95%以上。

圖 1

注意事項：

1)預填柱使用簡易方便，在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務。

2)樣品洗脫后一般pH很低，應立即用堿性中和緩沖液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0）將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩沖液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。

3)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內產生氣泡，影響純化效果，如果已經產生氣泡，可以自行重裝柱子。

4)通常（每次）目標樣品洗脫后應繼續用0.1 M檸檬酸緩沖液（pH 2 ~ 3）洗3 ~ 5個柱體積，然后用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上，作簡易再生。

5)使用數次后應進行在位清洗，建議用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3個柱體積（10 ~ 30 min），立即用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上；或70%乙醇洗5個柱體積以上（可保持4 ~ 16 h），再用平衡緩沖液清洗5柱體積以上。在位清洗能去除強疏水性蛋白質和脂類，恢復柱子的載量和流速。

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