NRPB06S 重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF預裝柱

相關介紹： 

耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF與普通的蛋白A瓊脂糖凝膠相比，主要提高了凝膠的耐堿性，可以用0.1 ~ 0.5 M NaOH溶液清洗和去除熱源。在骨架與重組耐堿蛋白A鍵合上分別設計了延伸碳臂和定向結合位點，保證了重組耐堿蛋白A與骨架的定向牢固鍵合，以及與抗體的高效親和。

技術指標：

產品特點：

1）配基脫落：約1~7 ng rat-PA/mg IgG，配套的rat-PA試劑盒（NRPB53S）檢測多次使用的洗脫液中殘留rat-PA含量

2）耐堿性

在25℃的條件下，將rat-PA浸在不同濃度的NaOH溶液中：

0.1 M 處理72 h載量維持在90%以上；

0.5 M處理16 h在80%以上，處理36 h在50%以上；

1.0 M處理4 h在90%以上，處理8 h在50%以上。

3）耐酸性

在25℃的條件下，將rat-PA浸在不同pH的酸溶液中：

pH 3.0、pH 2.0、0.1 M HCl (pH 1.0) 處理6天載量均維持在90%以上

0.5 M HCl處理2天載量在80%以上，處理6天在50%以上 

4）耐壓性

儀器：AKTA explorer 100

柱子：1.0 cm×30 cm

流速：每30 s增加0.5 ml/min

5）使用壽命

200次循環純化牛血清中IgG，每次使用0.1 M NaOH處理15 min，200次使用后未發現明顯的載量損失。

應用舉例：

結合緩沖液：20 mM磷酸緩沖液，150 mM NaCl，pH 7.4

洗脫緩沖液：0.1 M檸檬酸緩沖液，pH 4.0

中和緩沖液：1 M Tris-HCl，pH 9.0

1)1 ml耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF預填柱用5 ~ 10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液；

2)用結合緩沖液結合緩沖液平衡 5 ~ 10個柱床體積；

3)將5 ml兔多抗血清用結合緩沖液稀釋到50 ml，0.45 μm濾膜過濾上樣；

4)用結合緩沖液再洗 5 ~ 10個柱床體積；

5)用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調節其pH至中性；

6)每次使用后用3 ~ 5個柱床體積的0.1 M NaOH溶液再生清洗；

7)SDS-PAGE（圖1）電泳分析洗脫下來的兔多抗純度在95%以上。

圖 1

注意事項：

1)預填柱使用簡易方便，在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務。

2)樣品洗脫后一般pH很低，應立即用堿性中和緩沖液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩沖液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。

3)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內產生氣泡，如果已經產生氣泡，可以自行重裝柱子。

4)使用后應進行在位清洗，一般建議用0.1 M NaOH清洗1 ~ 3個柱體積（10 ~ 30 min），立即用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上。

5)更高要求（消毒、去內毒素、超牢固蛋白殘留等）的在位清洗，可以先用含還原劑（如100 mM DTT、β-ME或1-巰基甘油）的平衡緩沖液清洗3 ~ 5個柱體積，再用0.1 ~ 0.5 M NaOH洗1 ~ 5個柱體積（10 ~ 30 min），然后用無菌無內毒素的平衡緩沖液清洗5個柱體積以上。

6)雖然本產品具有較好的堿耐受性，但長期使用較高的NaOH濃度（如0.5 mol/L）清洗仍會縮短使用壽命，建議每1 ~ 3次用0.1 M NaOH清洗1次，每5 ~ 20次用0.5 M NaOH清洗1次。

7)為了更好的保護填料，應避免強烈的pH變化，建議酸性洗脫目的抗體后，用平衡緩沖液恢復至中性，再進行NaOH清洗。

8)本產品具有極低的配基脫落率（＜10 ng/mg IgG），結合耐堿特性，特別適用于單克隆抗體的生產。但實驗發現長期儲存后首次使用配基脫落率會比較高，建議長期儲存后的首次使用，先用酸性洗脫液清洗3 ~ 5個柱體積，再用平衡緩沖液平衡和樣品純化。

推薦流速

預裝柱體積 1 ml 5 ml 10 ml

流速(ml /min ) 0.2 1 2

9)

導購指南