NRPA37 重組BirA生物素連接酶(CBD標簽)（rC-BirA）

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　　BirA生物素連接酶由大腸桿菌中的BirA基因編譯表達，可用于特定蛋白質的生物素化反應，通過該酶的催化反應可將生物素共價連接到特定的蛋白質上。特定的蛋白質指含有AviTag的標簽蛋白，可通過基因工程方式獲得，AviTag一般由15個氨基酸殘基組成的小標簽（GLNDIFEAQKIEWHE），可以與目標蛋白的N端或C端融合，融合了AviTag的蛋白在BirA催化作用下，可將生物素共價連接到該標簽中的賴氨酸上，實現定向生物素化。

　　重組BirA生物素連接酶（CBD標簽）由BirA基因與CBDtag、HisTag融合表達，并高度純化，具有高活性、高效率、高純度、高穩定性的特點，可用于含AviTag重組蛋白的體外生物素化。

　　反應體系：50mM Bicine緩沖液，pH8.3，10mM ATP，10mM MgSO4，50μM生物素，40μM AviTag重組蛋白，10μg/ml rC-BirA，可參考下表加入各組分，30℃反應30min。也可以在其他溫度反應，如室溫25℃反應1-4h，或4℃反應過夜，不同的蛋白可能存在反應速率不一樣的情況，可適當調節酶量，以獲得更好的反應效果。除Bicine緩沖液外，其它緩沖液也可用于反應，如20mM Tris-HCl等，有些試劑會降低該酶的催化活性，如NaCl、甘油、硫酸銨、β-巰基乙醇等，應盡量降低樣品中這些試劑的含量。反應結束后的樣品可以通過透析、超濾、凝膠過濾等方式去除試劑，如需純化可用我司的ee-Streptavidin NUPharose FF可逆親和層析進行純化，特異性純化生物素化蛋白。

表1 rC-BirA催化AviTag重組蛋白生物素化參考反應體系

活性定義：在上述反應條件下，30℃、30min催化1nmol AviTag重組蛋白生物素化所需的酶量為1U。

M：蛋白質分子量標準

Lane 1：rC-BirA

注意：本產品僅限于科研使用。