NRPB60 易洗脫鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF

相關介紹： 

　　易洗脫鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF是一種將易洗脫鏈霉親和素鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質。與鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF相比，該介質最主要的特性是可以溫和洗脫結合在介質上的生物素化物質，如生物素化抗原、生物素化抗體、生物素化蛋白、生物素化核酸等，可用于AviTag融合表達的生物素化蛋白純化、經過標記反應后的生物素化和非生物素化物質的分離、生物素化抗原抗體固定化和重復回收利用等。

　　由于鏈霉親和素與生物素的超強親和力，它們常用于檢測、診斷、分析等領域，但其超強的結合能力導致溫和常用的方法都不能將其復合物解離，由于這特特性限制了它們在生物純化方面的大范圍應用，本介質的配基經過分子層面的設計改造，大幅降低與生物素的親和力，同時保持了高度特異性，所以一步層析就可獲得有活性、高純度的生物素化物質。

與生物素化物質結合后的ee-SA FF可通過含D-生物素的緩沖液競爭洗脫。該洗脫方式非常溫和，一般不會影響目標物的活性，洗脫液中的D-生物素可通過換液方式去除。

技術指標：

使用方法：

1、色譜柱裝填

（1）所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。

（2）在柱子下端加入蒸餾水，以除去柱子中的空氣，關閉柱子出口，在柱內保留少量的蒸餾水。

（3）將瓊脂糖凝膠連續倒入柱子時，要用玻璃棒的緊靠柱子內壁引流，以減少氣泡的產生，讓填料先自然沉降。

（4）柱壓不超過0.3MPa，如果裝柱系統中無法測柱壓，則正常流速下填裝。

（5）填裝好的ee-SA FF柱用2-5個柱體積的結合緩沖溶液平衡，建議流速100cm/h，平衡后的柱子可以用于生物素化蛋白、生物素化抗原抗體等生物素化物質的親和純化。

2、上樣

（1）緩沖液選擇：一般選用pH6-8的結合緩沖液，常用緩沖液有10-00mM 磷酸鈉緩沖液、20-200mM Tris-HCl緩沖液等，根據樣品的穩定性，也可添加其他成分，如NaCl、還原劑、螯合劑等。在初次使用ee-SA FF時，推薦使用20mM PBS（20 mM NaH2PO4，0.15M NaCl，NaOH調節pH 7.4）或20mM Tris-HCl，0.15MNaCl，pH8.0作為結合緩沖液。

（2）樣品處理：樣品的緩沖液應與所選結合緩沖液一致。為保證緩沖液一致，可以在結合緩沖液中破碎細菌、或調解pH與結合緩沖液一致、或交換至結合緩沖液（常用方法有透析、超濾、脫鹽柱換液等）、或用結合緩沖液稀釋2-10倍等。樣品上柱前應0.45μm過濾。

（3）上樣流速：一般線性流速20-100cm/h均可。

3、洗脫

結合了生物素化物質的ee-SA FF可采用溫和的方式洗脫，一般在結合緩沖液中加入1-5mM的D-生物素作為洗脫緩沖液，通過競爭的方法洗脫。

4、在位清洗

（1）多次使用后需要再生，本產品耐受一定的堿性，推薦使用2-5個柱體積的20-100mM NaOH溶液反向清洗柱子，進行再生。

（2）其他方法，比如1-2M NaCl、70%乙醇、30%異丙醇等，也可用于該介質的再生。

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