NRPB56L GST-瓊脂糖凝膠4B

相關介紹：

GST-瓊脂糖凝膠4B是一種將谷胱甘肽鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質，主要用于谷胱甘肽轉移酶標記蛋白（GST融合蛋白）、谷胱甘肽轉移酶和谷胱甘肽依賴蛋白的分離純化，通過一步親和層析，就能獲得高純度的蛋白。與GST-瓊脂糖凝膠FF相比，GST-瓊脂糖凝膠4B能獲得更高的載量。

技術指標：

使用方法：

1. 裝柱

1.1 根據分離目標性質配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

1.2 將凝膠抽干，并用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇，用蒸餾水配成勻漿并脫氣。

1.3 將層析柱垂直固定，底端用水或緩沖液潤濕并保持一段液位。

1.4 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，使凝膠在柱內自由沉降。

1.5 連結好柱子頂端活動柱頭，打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時操作流速流過5柱體積，再使用1.5倍的操作流速流過5柱體積，調節適配柱頭，使其盡量貼近膠面，最后用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

注意：（1）所有操作過程不能引入氣泡，保證裝膠的均勻度。（3）如無條件做1.2，填料層有氣泡，可進行2次裝柱，去除保存的乙醇和氣泡。（4）乙醇等試劑配制的溶液需要脫氣。

2. 平衡

將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱，觀察檢測器的變化，直到電導、pH等參數不變。推薦的結合平衡緩沖液為：10mM PBS (140mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH 7.4)。

3. 上樣

切換轉換閥進行上樣，上樣量根據樣品的性質和層析介質的量進行選擇，也可進行線性實驗找到最佳上樣量；樣品的預處理：置換緩沖液，澄清過濾（0.45、0.22μm）等。

4. 沖洗

用2-3個柱體積的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱，觀察檢測器的變化，直到電導、pH等參數不變，此時未交換的組分被清洗出去。

5. 洗脫

一般推薦用10mM還原型谷胱甘肽溶液（可含緩沖成分）進行洗脫。推薦的洗脫緩沖液為：50mM Tris-HCl, 10 mM 還原型谷胱甘肽(GSH), pH 8.0。

6. 再生

用蒸餾水按操作流速沖洗3-5個柱體積，接著用平衡液洗到平衡3-5個柱體積。

若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7. 在位清洗(CIP)

去除沉淀和變性蛋白：用2CV 6M鹽酸胍清洗，立即用10mM PBS(pH7.4)洗5CV。

去除強疏水蛋白：用3-4CV 70%乙醇清洗，立即用10mM PBS(pH7.4)洗5CV。

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