NRPB52L 重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF

相關介紹：

重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF是將重組大消化鏈球菌蛋白L（Recombinant Peptostreptococcus magnus Protein L，簡稱r-PPL）偶聯在高度交聯的瓊脂糖凝膠上的一種親和純化介質。大消化鏈球菌蛋白L（PPL）能與抗體的κ輕鏈結合而不會影響抗體的抗原結合位點，這一特性使其與結合抗體Fc區域的蛋白A、蛋白G相比，能更廣泛地結合各種來源及亞類的抗體。如人類的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ輕鏈（人類1、3、4型，小鼠1型）的Fab、scFv等抗體片段。但不能與重鏈、λ輕鏈、κ輕鏈（2型）結合，所以重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF不能純化牛、山羊、綿羊、雞來源的抗體。

技術指標：

抗體與蛋白A、蛋白G的結合力：

注：-表示不結合；+表示微弱結合；++表示中等結合；+++表示很強結合；NA表示暫無數據。能用于親和純化的抗體一般需要中等以上的結合力。

應用舉例：

結合緩沖液：20 mM磷酸鹽緩沖液（PB），pH 7.4

洗脫緩沖液：0.1 M檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，pH 2.7

中和緩沖液：1 M Tris-HCl，pH 9.0

1)1 ml重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF預裝柱，用5~10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液；

2)用結合緩沖液平衡 5~10個柱床體積；

3)將3 ml小鼠腹水用結合緩沖液稀釋至15 ml，0.45 μm濾膜過濾上樣；

4)用結合緩沖液平衡 5~10個柱床體積至基線；

5)用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調節其pH至中性；

6)每次使用后再用3~5個柱床體積的洗脫緩沖液再生清洗；

7)SDS-PAGE（圖1）電泳分析洗脫下來的小鼠單抗純度在95%以上。

注意事項：

1)預填柱使用簡易方便，在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務。

2)樣品洗脫后一般pH很低，應立即用堿性中和緩沖液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5%~20%、pH 7-9的緩沖液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。

3)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內產生氣泡，影響純化效果，如果已經產生氣泡，可以自行重裝柱子。

4)通常目標樣品洗脫后應繼續用0.1 M檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH 2.0~2.7）洗3~5個柱體積，然后用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上，作簡易再生。

5)使用數次后應進行在位清洗，建議用0.1% Triton X-100 37℃洗1-3個柱體積（10~30min），立即用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上；或70%乙醇洗5個柱體積以上（可保持4~16h），再用平衡緩沖液清洗5柱體積以上；或10mM NaOH洗1-3個柱體積（10-20min），再用平衡緩沖液清洗5柱體積以上。在位清洗能去除強疏水性蛋白質和脂類，恢復柱子的載量和流速。

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