NRPB42L Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF

相關介紹： 

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF是一種將Strep-Tactin鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質，主要用于純化Strep II標簽蛋白。Strep II標簽為8個氨基酸的小標簽（WSHPQFEK），由于標簽小，僅為1 kDa左右，一般不影響融合后蛋白質的結構和功能，常用于融合表達蛋白質的檢測和純化。

本產品的配基Strep-Tactin是鏈霉親和素（Streptavidin）的突變體，與鏈霉親和素相比，Strep-Tactin對Strep II標簽的親和能力至少強10倍以上，能夠在溫和的條件下與Strep II融合蛋白結合和解離。由于Strep-Tacin對Strep II標簽具有高度特異性，一般一步純化就能獲得高純度的蛋白質樣品。

Strep II標簽蛋白與凝膠結合后可使用脫硫生物素競爭方式進行洗脫，該洗脫方式比較溫和，一般不會影響蛋白質的性質。如Strep II標簽蛋白質能耐受堿性條件，也可用堿液洗脫，比如10 mM NaOH等。

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF能耐受較高的堿性條件，可以用0.5 M NaOH進行再生清洗和去除熱源等。

另外，2-(4-羥基苯唑)苯甲酸（HABA）也可用于凝膠再生，過量的HABA能以競爭的方式替換脫硫生物素，但在無HABA的緩沖液中， Strep-Tactin與HABA會發生解離，從而使HABA脫落，實現再生。

技術指標：

使用方法：

1 推薦緩沖液

純化Strep II標簽蛋白

結合緩沖液：100 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，pH 8.0；

 　　　　　　或20 mM NaH2PO4，280 mM NaCl，6 mM KCl，pH 7.4

洗脫緩沖液：結合緩沖液 + 2.5 mM 脫硫生物素；

 　　　　　　或10 mM NaOH

再生緩沖液：0.5 M NaOH；

 　　　　　　或結合緩沖液+1 mM HABA

2 樣品準備

上柱的樣品應盡量保持與結合緩沖液一致。通?？捎猛肝?、超濾、稀釋等方法處理樣品。并且上柱前應過0.45 μm濾膜或高速離心去除不溶物。

3 樣品純化

3.1 平衡：取適量的Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中，用蒸餾水清洗5個柱體積去除保存液，再用結合緩沖液平衡5個柱體積，建議流速為100 cm/h。

3.2 上樣：將準備好的樣品上柱，建議流速為20 ~ 100 cm/h，可根據實際結合情況選擇流速，能獲得較好的效果。

3.3 再平衡：上樣后用結合緩沖液平衡10個柱體積以上，或平衡至基線，洗去雜質，推薦流速為100 cm/h。

3.4 洗脫：用洗脫緩沖液洗10 ~ 20個柱體積，建議流速為100 cm/h，收集的洗脫液應立即調節pH至穩定范圍，并根據需要置換緩沖液。

3.5 NaOH再生：洗脫目的蛋白后的柱子用蒸餾水清洗3 ~ 5個柱體積，并用0.5 M NaOH再生3 ~ 5個柱體積，再用蒸餾水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子，或進行下一次純化。

3.6 HABA再生：用脫硫生物素洗脫目的蛋白的，還可以用HABA緩沖液再生，一般用HABA的結合緩沖液洗15個柱體積，再用結合緩沖液洗30個柱體積，然后可以用20%乙醇保存柱子，或進行下一步純化。HABA上柱后凝膠顏色會變為紅橙色，在結合緩沖液平衡后會恢復正常的白色，這種再生方式一般使用體積會大些。

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